ames实验原理和方法(Ames实验的原理)

大家好,小活来为大家解答以上的问题。什么是ames试验，ames实验这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧！

1、Ames试验的常规方法有斑点试验和平板掺入试验。

2、1．菌株鉴定 用于测试的菌株，需经基因型和生物学性状鉴定，符合要求才能投入使用。

3、目前推荐使用的一套菌株是TA97、TA98、TA100和TA102。

4、鉴定前先进行增菌培养。

5、为鉴定结果可靠，需同时培养野生型TV菌株，作为测试菌基因型之对照。

6、增菌培养用牛肉膏蛋白胨液体培养基，接种后于37℃，100r/min振荡培养12h左右，细菌生长相为对数期末，含菌数应为1×109个/ml～2×109个/ml。

7、鉴定项目：（1）脂多糖屏障丢失（rfa）用接种环或一端挠起的接种针以无菌操作术取各菌株的增菌培养液，在营养琼脂平板上分别划平行线，然后用灭菌尖头镊夹取灭菌滤纸条，浸湿结晶紫溶液，贴放在平板上与各接种平行线垂直相交。

8、盖好皿盖后倒置于37t温箱，培养24h后观察结果。

9、（2）R因子 划线接种，贴放滤纸条及培养等均同上，唯滤纸条浸湿的药液不同，为氨苄青霉素钠溶液。

10、TA102除pKM101外，还有pAQ1，载有抗四环素的基因，故另用滤纸条浸湿四环素溶液后贴放于划线接种的平板上。

11、（3）紫外线损伤修复缺陷（△uvrB）在营养琼脂平板上按上述方法划线接种后，一半接种线用黑玻璃遮盖，另一半暴露于紫外光下8sec，然后盖好皿盖并用黑纸包裹平皿，防止可见光修复作用。

12、培养同上。

13、（4）自发回变 预先制备底平板；向灭菌并在水浴内保温45℃的上层软琼脂中注入0.1ml菌液；混匀后倾于底平板上并铺平。

14、平皿倒置于37℃温箱培养48h。

15、（5）回变特性——诊断性试验 上层软琼脂中除菌液外，还注入已知阳性物之溶液，需活化系统者并加入S9mix，余同上。

16、组氨酸营养缺陷型由自发回变即可知。

17、2．斑点试验 吸取测试菌增菌培养后的菌液0.1ml，注入融化并保温45℃左右的上层软琼脂中，需S9活化的再加0.3ml－0.4mlS9mix，立即混匀，倾于底平板上，铺平冷凝。

18、用灭菌尖头镊夹灭菌圆滤纸片边缘，纸片浸湿受试物溶液，或直接取固态受试物，贴放于上层培养基的表面。

19、同时做溶剂对照和阳性对照，分别贴放于平板上相应位置。

20、平皿倒置于37℃温箱培养48h。

21、在纸片外围长出密集菌落圈，为阳性；菌落散布，密度与自发回变相似，为阴性。

22、3．平板掺入试验 将一定量样液和0.1ml测试菌液均加入上层软琼脂中，需代谢活化的再加0.3ml－0.4ml S9mix，混匀后迅速倾于底平板上铺平冷凝。

23、同时做阴性和阳性对照，每种处理做3个平行。

24、试样通常设4个～5个剂量。

25、选择剂量范围开始应大些，有阳性或可疑阳性结果时，再在较窄的剂量范围内确定剂量反应关系。

26、培养同上。

27、同一剂量各皿回变菌落均数与各阴性对照皿自发回变菌落均数之比，为致变比（MR）。

28、MR值≥2，且有剂量-反应关系，背景正常，则判为致突变阳性。

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