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免疫组化的步骤的图片(免疫组化的步骤)

2022-12-30 20:15:11游戏575

关于免疫组化的步骤的图片,免疫组化的步骤这个很多人还不知道,今天就让小编猫猫来为大家解答以上的问题,现在让我们一起来看看吧!

1、1. 切片常规脱蜡至水。

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2、如需抗原修复,可在此步后进行2.缓冲液洗 3min/2 次。

3、3. 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。

4、4. 缓冲液洗 5min/2 次。

5、5. 滴加 Ultra V Block , 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。

6、(注:孵育不要超过 10 分钟,否则会导致特异性染色降低。

7、如果一抗的稀释液中含有 5 - 10% 正常羊血清,这一步可以省略。

8、)6. 缓冲液洗 5min/2 次。

9、7. 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小时。

10、(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)8. 缓冲液洗 5min/2 次。

11、9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer(增强子),在室温下孵育 20 分钟。

12、10 .缓冲液洗 5min/2 次。

13、11 .滴加 HRP Polymer(酶标二抗) ,在室温下孵育 30 分钟。

14、(注:HRP Polymer 对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。

15、)12 .缓冲液洗 5min/2 次。

16、13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen),混匀后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分钟。

17、(具体时间由染色深浅决定。

18、)14 .自来水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片。

19、简介:免疫组化,是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

20、基本原理:抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。

21、先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。

22、由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原抗体结合的部位显示出来,以其达到对组织或细胞中的未知抗原进行定性,定位或定量的研究。

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